Die nukleïensuursintese word uitgevoer deur gebruik te maak van die vastefase siaalamied-trigliseriedmetode, waardeur die 3'-punt van die DNA op 'n vastefase-substraat geïmmobiliseer word en nukleotiede in die 3'- tot 5'-rigting bygevoeg word totdat die verlangde DNA-fragment gesintetiseer is. .Dit verskil van DNA-sintese deur die toepassing van DNA-polimerase.
Die 3'-punt van die eerste basis word tydens sintese op CPG geïmmobiliseer, die 5'-OH van die volgende basis word beskerm met di-p-tolyl tritiel DMT, die aminogroep op die basis word beskerm met bensoësuur en die 3' -OH word dan geaktiveer met 'n aminofosfaatverbinding.1 basis van die 5 5'-OH van 1 basis en 3'-OH van die volgende basis vorm 'n fosfiet trigliseried, wat dan met jodium geoksideer word na 'n fosfaat trigliseried, die beskermende middel op die tweede basis 5'-OH word verwyder d.m.v. byvoeging van dichloorasynsuur DM siklusse deur die byvoeging van die volgende basis, en na sintese word die beskermende middel op die 5'-OH verwyder met 'n swak suur Die fragment word van die vaste hars ontkoppel met gekonsentreerde ammoniumhidroksied, die beskermende middel word van die basis verwyder met gekonsentreerde ammoniumhidroksied onder verhitting, word die ammoniumhidroksied verwyder, die fragment word vakuum gedroog, en die nukleïensuur word gesuiwer deur vloeistofchromatografie of PAGE.
Stappe van Oligosintese
Deblokkeer
Die5-einde DMT-beskermende groep word verwyder deur TCA-oplossing by te voeg.
Aktivering
Meng die aktiveerder met die oligonukleotiedmonomeer om die aktiewe oligonukleotiedmonomeer-tussenproduk te vorm.
Koppeling
Die 5-terminale hidroksielgroep reageer met die aktiewe oligonukleotied-tussenproduk in 'n anti-generatiewe kondensasiereaksie om 'n onstabiele fosfiet-trigliseriedbinding te vorm.
Bedekking
Die byvoeging van 'n kappingsmiddel voer 'n asetileringsbedekkingsreaksie uit met oormaat hidroksielgroepe wat nie by die kondensasiereaksie betrokke is nie.
Oksidasie
Die byvoeging van jodiumoplossing wat water bevat reageer met onstabiele fosfietbindings deur oksidasie om stabiele fosforsuurtrigliseriedbindings te vorm.
Sianoethyl-splyting
Die nukleïensuurproduk na sintese, met die toevoeging van DEA-oplossing om die siano-etielgroep van die fosfaattrigliseriedbinding te verwyder.
Gekloof & Ontskerming
Die nukleïensuurfragmente word van die vastefase-draer afgesplit deur 'n gekonsentreerde ammoniumhidroksiedoplossing by te voeg en dan verhit om die beskermende groepe van die waterstofbindings van die basisse te verwyder.
Pos tyd: Nov-21-2022